大家好，小评来为大家解答以上问题。rt-pcr步骤，pcr步骤很多人还不知道，现在让我们一起来看看吧！
1、在冰浴中，按以下顺序将成分加入无菌0.5ml离心管中。
2、10 times PCR buffer
3、5 microliters of dNTP mixture (2 mm)
4、4微升引物1(10微米)
5、2微升引物2(10微米)
6、2 l Taq enzyme (2U/ l)
7、1 l DNA template (50 ng -1 g/ l)
8、Add ddH2O to 1 microliter to 50 microliter.
9、根据PCR仪器是否有热盖，石蜡油是不加还是加。
10、调整反应程序。稍微离心混合溶液，并立即将其放在PCR仪器上进行扩增。一般在93预变性3-5min，进入循环扩增阶段：9340s5830s7260s，30-35个循环。
11、最后，在72保温7min。
12、反应结束后，将PCR产物置于4下进行电泳检测或在-20下长期保存。
13、PCR的电泳检测：若反应管中加入石蜡油，应使用100l氯仿萃取反应混合物以去除石蜡油；否则，直接取5-10l进行电泳检测。
本文到此结束，希望对大家有所帮助。
